Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型冠心病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出肝细胞自身病原棒状到显现出1HG哮喘流行病学呕吐的重大突破所部在青少年时期就有很好的所述，多个肝细胞自身病原棒状HIV的青少年当中有70%在血清转换后10年内患上哮喘，而随访15年的青少年这一比所部增高到84%。即便如此，占总流行病学1HG哮喘一半以上的HG1HG哮喘的发病的系统还没有获取适当的研究课题。

越来越多的人开始应当用于分期系统对来定义1HG哮喘的重大突破：个棒状在显现出多种肝细胞自身病原棒状时转至第1前期，显现出浓度异常时转至第2前期，显现出呕吐时转至第3前期。一些多发肝细胞自身病原棒状HIV的个棒状，在1期和2期，重大突破较快，并发展为发病的1HG哮喘。我们之后所述了一三组在首次侦测到多种肝细胞自身病原棒状抽取后有数10年无哮喘的近乎慢重大突破者，这三组病症000人少，但外观上非常明确。随后，我们找到肝细胞自身特异性特异性CD8+T蛋白质化学反应当在重大突破平稳的病症当中必需不存在，但在全面性发病和曾一度存在的哮喘病症当中很较易侦测到。这也许表明，与重大突破病症远比，这些病症自身致病的可调增强。

更早研究课题表明，尽管可调性T蛋白质(Treg)数量正常，但哮喘病症存在一些特性缺陷，其当中包含对IL-2的化学反应当能力下降。此外，哮喘病症当中的不稳定性CD4+T蛋白质也许对可调凸显抵抗性，表现为不稳定性T蛋白质的诱导增强，大自然消除的Treg和棒状外消除的诱导Treg，以及特异性经历的CD4+T蛋白质当中IL-2化学反应当增强。本研究课题的目的是所述了CD4+可调性T蛋白质(Treg)在大群近乎平稳重大突破者当中的外观上，他们的平均成年为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以年轻人相结合的纵向研究课题，在21岁所列确诊的病症亲属当中检测1HG哮喘的致命因素。我们之后所述了曾一度平稳重大突破者的外观上，他们保证多重肝细胞自身病原棒状HIV将近10年，但没有显现出哮喘的流行病学呕吐，慢性或非顺利完成性神经性。随后，10名继续保证无哮喘并想透过大量血液抽取的平稳重大突破者设为T和B蛋白质特性比对。在以外的研究课题当中，8名慢重大突破者(SP三组)，当中位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的肝细胞自身病原棒状HIV。所有的旁观者都属于1HG哮喘重大突破的1期，尽管一些人随后挽回了肝细胞自身病原棒状对某些特异性的HIV化学反应当，然而，一名病症仍然属于2期有数6年，但没有显现出流行病学呕吐，一名病症被流行病学为哮喘，该测试者72岁，在搜集实验抽取时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据比对当中对该供棒状顺利完成了实际上评估。分离外周血单个核分裂蛋白质(PBMCs)，采用多变量流式蛋白质奥义和T蛋白质诱导试验中评估供棒状当中Treg的频带、基因HG和特性。应当用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、举例来说和重返)顺利完成无指派聚类比对，评估Treg基因HG。

结果：与健康供棒状远比，来自慢重大突破棒状的无意识CD4+T蛋白质的指派聚类标示出，激活的无意识CD4+ Treg频带增高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)传达增高有关。一名HbA1c下降的病症与重大突破平稳者和匹配的控制三组远比，Treg谱有所相异。特性比对表明，与健康供棒状远比，来自平稳重大突破棒状的Treg介导的CD4+不稳定性T蛋白质诱导显著受到影响。表现为对不稳定性CD4+T蛋白质CD25和CD134传达的诱导增高。

所示1 透彻的基因HG比对标示出，CD4+Treg变异在慢重大突破函数调用当中增高。由FlowSOM降解的Treg室，组织起来在来自所有供棒状的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标识物传达鉴别出10个元簇:无意识T蛋白质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)应当用于9个相异Treg标识降解的10个元簇的MST。每个节点代表人一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在节点三组区域内手工。每个节点当中的甜品所示暗示单个标识的传达档次。(b)每个元聚类的热所示，以标示出整棒状标识传达。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)降解所示，以及FlowSOM比对的每个元簇的裂口。(e-l)比起金属量为每个metacluster筒中央线所示(金属量> 0.05%)明确为HD和SP三组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白质(l)。浅蓝色白点代表人慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 应当用于CITRUS的预测模HG证实，Treg频带的增高是重大突破平稳的标记。基准去近乎化(a - f)和橄榄比对(g-k)比较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的相似之处。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的代表人性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利完成分离，模拟FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)三组以及供棒状SP 606(浅蓝色)当中CD25+ cd127的频带概要所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去近乎化子集的筒中央线所示;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度制做，交叉突出的簇被比对为SP和HD函数调用中间的相异。(j)筒中央线所示标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)三组当中，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的比起金属量(比所部)。(k)直方所示标示出每个簇的基因HG(粉红色)和Treg标识比起传达与时代背景传达(浅蓝色);上列，内核Treg_3;下面一路上，内核Treg_4。时代背景与所有其他簇当中标识的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

所示3 与健康献血者远比，重大突破平稳者无意识treg的GITR增高。每个无意识CD4+T蛋白质元簇(无意识T蛋白质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个传达标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的传达热所示(sp606不包含在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇当中所有HD(红色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR传达串联，标示出直方所示(c)和概要所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有供棒状包含，p< 0.05(浅蓝色)供棒状SP 606和匹配的HD不包含在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR传达，从基准去近乎化，从所有HD(红色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，标示出直方所示(e)和概要所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

所示4 来自平稳重大突破的CD4+ treg蛋白质控制不稳定性CD4+T蛋白质的能力下降。SP三组用浅蓝色的中央线和白点暗示，HD三组用浅蓝色的中央线和白点暗示，浅蓝色的中央线/白点暗示供棒状sp606。应当用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利完成分选。CD4+CD25−(应当答者)被标识为CFSE, Treg按仔细观察的比所部高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠活化蛋白质，培养出来3天内顺利完成流式蛋白质奥义侦测。(a-d)与CD4+应当答者比起应当的treg培养出来(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应当答者培养出来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱导总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导总和。应当用于HIV对照(激活的响应当蛋白质不含treg)计算诱导总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 不稳定性CD4+T蛋白质对平稳重大突破的T蛋白质活化的诱导更敏感。SP三组用浅蓝色的中央线和白点暗示，HD三组用浅蓝色的中央线和白点暗示，浅蓝色的中央线/白点暗示供棒状sp606。应当用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利完成分选。CD4+CD25−(应当答者)被cfsel标识，treg按仔细观察的比所部高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠活化蛋白质，培养出来3天内顺利完成流式蛋白质奥义(CD25反染)和蛋白质因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606应当答者共同培养出来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱导花红(b)。(c,d) CD25诱导花红(c)和CD134诱导花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在培养出来出来当中的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论据：我们得出的论据是，来自平稳重大突破子的活化无意识CD4+Treg在GITR传达当中获取了扩展和丰富，强调了实质性研究课题Treg在1HG哮喘风险个棒状当中的值得注意的必要性。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28